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  • 血细胞计数板【血细胞计数板的构造和使用方法简介】

    分类:个人简历100字 时间:2019-05-13 本文已影响

      【摘要】人民教育出版社高中生物教材必修3《稳态与环境》中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”实验用到血细胞计数板(血球计数板),教材中没有介绍其构造和用法,学生对此感到很生疏。本文简要介绍血细胞计数板的构造和使用方法。
      【关键词】血细胞计数板的构造 计数方法 使用方法
      人民教育出版社高中生物教材必修3《稳态与环境》中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”实验用到血细胞计数板(血球计数板),教材中没有介绍其构造和用法,学生对此感到很生疏。下面简要介绍血细胞计数板的构造和使用方法。
      1.血细胞计数板的构造
      血细胞计数板 (血球计数板)是显微镜上的外挂物件,可用来测量细胞、细菌等一些微小物体的长度,测量单位体积细胞的数量等。血细胞计数板是由一块比普通玻片大而厚的特制玻璃片制成的,它的两边有两个凸起部分,中间有四条槽沟构成三个平台,中央的平台较宽,而且被一短槽隔成两半,每个半边上各刻有一个方格网,每个方格网共有九大格,中央的大格就是计数室、中央的平台比两边稍低,加盖盖玻片后,中央平台要比两边平台低0.1mm,也就是盖上盖玻片后计数室深度为0.1mm.。(见图A、B、C、D)
      1.1 计数室的规格有两种,一种是由25中格组成,每个中格又分为16个小格(共25×16=400小格)(见图E);另一种是由16中格组成,每个中格又分成25个小格(共16×25=400小格)(见图F)。可见,尽管计数室有两种规格,但是,不管计数室是哪一种构造,它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是16×25=25×16=400个小方格组成。
      1.2 计数室的大小有两种,一种是边长为1mm,则计数室面积为1mm2,每个小格面积为1400mm2 ,盖上盖玻片后,计数室的高度为0.1mm。所以,一个计数室的体积为0.1mm3,每个小方格的体积为14000mm3 ;另一种是边长为2mm,则计数室的面积为4mm2,每个小格面积为1100mm2,盖上盖玻片后计数室的高度为0.1mm,所以,一个计数室的体积为0.4mm3,每个小方格的体积为11000mm3。
      2.计数方法
      2.1 25×16计数室:显微镜下数左上、右上、左下、右下和中央共五个中格,即5×16=80个小方格的细菌数,若这80个小方格细菌数为A(对每个样品计数三次,取其平均值)。①若计数室的边长为1mm,则每毫升菌液的含菌量计算公式为 A80×400×10×1000=50000A(若菌液被稀释,还要乘以稀释倍数);②若计数室的边长为2mm,则每毫升菌液的含菌量计算公式为A80×400×2.5×1000=12500A (若菌液被稀释,还要乘以稀释倍数)。
      2.2 16×25计数室:显微镜下数左上、右上、左下、右下共四个中格,即4×25=100个小方格的细菌数,若这100个小方格的细菌数为B(对每个样品计数三次,取其平均值)。①若计数室边长为1mm,则每毫升菌液的含菌量计算公式为B100×400×10×1000=4000B (若菌液被稀释,还要乘以稀释倍数)。②若计数室的边长为2mm,则每毫升菌液的含菌量计算公式为B100×400×2.5×1000=10000B (若菌液被稀释,还要乘以稀释倍数)。
      3.使用方法(以酵母菌为例)
      3.1 取血细胞计数板,盖上盖玻片,将加入酵母菌的试管摇匀后,用滴管吸取少许菌液,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的边缘滴入一小滴,菌液会沿着沟槽扩散,充满计数区,然后用吸水纸吸去多余的菌悬液。
      3.2 静置数分钟,待全部菌体细胞沉降到载玻片表面再置于显微镜下观察,先用低倍镜观察,找到计数板刻度后,换高倍镜计数,将结果记录下来,作为原始数据使用,取下盖玻片,用水将计数板浸泡、冲洗干净(切勿用硬物洗刷或擦抹,以免损坏网格刻度),待自然晾干,放入盒内保存。
      3.3 每个样品计数通常应重复三次以上,取平均值,求出每个小方格中的酵母菌平均数,按以上计数方法计算。
      3.4 由于菌液处于不同的空间位置,要在不同的焦距下才能看到,故观察时必须不断调节细准焦螺旋,才能找到全部菌体,以免误差,对于压线的菌体,采取计上不计下,计左不计右的计算方法,以减少误差,若酵母菌已出芽,只要芽体达到母体的12,即可单独计为一个个体。
      3.5 由于酵母菌是单细胞生物,细胞体积很小,不易观察,在观察显微镜时,要注意对视野的明暗进行选择,太明或太暗都不好,如果样品密度很大,为了计数准确,常常需将待测样品稀释成不同浓度的菌液后再进行计数,一般每一小格内酵母菌数目平均在10个以上的,通常应该稀释,稀释倍数以每小格5~6个菌体为宜。
      3.6 取液过程中,为了防止污染,一定要用无菌滴管或无菌移液器,稀释时尽量取少一些,稀释后的溶液不能放回原液。
      4.血球计数板的清洁
      血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净,则必须重复清洗直到干净为止。
      举例:在用血细胞计数板(1mm×1mm)刻度为25中格×16小格,装入液体后液体高度为0.1mm,经过计数计算,求得每个小格中的平均酵母菌数为A个,且已知稀释倍数为B,则1mL培养液中的酵母菌数为个?(答案4AB×106)。
      参考文献
      [1] 《高中生物新课程探究实验指导》,教育部教学仪器研究所,凯普生物科技有限公司 编著.人民教育出版社,2007年2月第1版.

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